氨基液相色譜柱在色譜儀分析系統中起著(zhù)分離作用,是色譜分析的核心部件。正確使用和維護色譜柱尤為重要,使用不當就會(huì )降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。液相色譜的柱子通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱,或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團的鍵合相硅膠柱;反相柱填料主要以硅膠為基質(zhì),在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(ODS)稱(chēng)為C18柱,其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱,GPC柱,聚合物填料柱等。
氨基液相色譜柱使用前注意事項:
液相色譜柱的儲存液無(wú)特殊說(shuō)明,均為評價(jià)報告所示的流動(dòng)相。在使用前,一定要注意液相色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動(dòng)相是否互溶。在反相色譜中,如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑,應先用10%左右的低濃度的有機相洗脫劑過(guò)渡一下,否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出,堵塞色譜柱。
1、流動(dòng)相:
流動(dòng)相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純,配流動(dòng)相的水最好是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動(dòng)相再經(jīng)過(guò)0.45μm的濾膜過(guò)濾一次則更好,尤其是含鹽的流動(dòng)相。另外,裝流動(dòng)相的容器和色譜系統中的在線(xiàn)過(guò)濾器等裝置應該定期清洗或更換。
以常規硅膠為基質(zhì)的鍵合相填料通常的pH值適用范圍是2.0-8.0。當必須要在pH值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時(shí),每次使用結束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動(dòng)相互溶的溶劑清洗,并*置換掉原來(lái)所使用的流動(dòng)相。
2、樣品:
樣品也要盡可能清潔,可選用樣品過(guò)濾器或樣品預處理柱(spe)對樣品進(jìn)行預處理;若樣品不便處理,要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時(shí),所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。