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2020版藥典一部 地黃飲片和熟地黃中地黃苷D的分析
更新時(shí)間:2021-04-19   點(diǎn)擊次數:5081次

客戶(hù)向我們提供了地黃苷D標準品溶液(液體)、地黃飲片和熟地黃(固體粉末)。希望本實(shí)驗室能夠按照2020版《中國藥典》中分析方法,篩選合適的色譜,使地黃飲片和熟地黃中地黃苷D與其前后相鄰雜質(zhì)之間的分離度能夠達到基線(xiàn)分離,同時(shí),地黃苷D峰的理論塔板數應滿(mǎn)足藥典要求(不低于5000)。

 

我們按照2020版《中國藥典》熟地黃含量測定項下方法,對地黃飲片和熟地黃進(jìn)行了提取處理,然后按照藥典方法,

CAPCELL PAK C18 MGII色譜柱上得到了良好的分析結果。

 

 
  

 

首先,下圖為使用CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d. × 250 mm色譜柱,對地黃苷D標準品的分析結果。

 

HPLC Conditions :

色譜柱:CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d.×250 mm

流動(dòng)相:0.1%磷酸/甲醇 = 95/5

流   速:1.0 mL/min

溫   度:35°C

檢   測:UV 203 nm

濃   度:客戶(hù)提供

進(jìn)樣量:10 µL

 

結果中,地黃苷D的保留時(shí)間為28.135 min,理論塔板數為13067,滿(mǎn)足藥典不低于5000的要求,峰不對稱(chēng)因子為1.00,峰形良好。

 

隨后,我們使用同樣方法對熟地黃和地黃飲片的實(shí)際樣品進(jìn)行了分析,結果如下圖所示:

 

 

HPLC Conditions :

色譜柱:CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d.×250 mm

流動(dòng)相:0.1%磷酸/甲醇 = 95/5

流   速:1.0 mL/min

溫   度:35 °C

檢   測:UV 203 nm

濃   度:樣品按藥典方法處理

進(jìn)樣量:10 µL

 

地黃飲片中黃苷D與其前后相鄰雜質(zhì)之間的分離度分別為1.52和1.88,熟地黃中地黃苷D與其前后相鄰雜質(zhì)之間的分離度分別為1.65和1.89,均可以得到基線(xiàn)分離。

然而從上面實(shí)際樣品的結果可以看到,地黃飲片樣品中地黃苷D與其前相鄰雜質(zhì)之間的分離度僅為1.52,剛剛達到基線(xiàn)分離,為了使其得到更好的分離,我們嘗試對柱溫進(jìn)行調整,分別在30℃和40℃對地黃飲片進(jìn)行分析,結果如下面兩張圖所示:

 

 

HPLC Conditions :

色譜柱:CAPCELL PAK C18 MGII S5; 4.6 mm i.d.×250 mm

流動(dòng)相:0.1%磷酸/甲醇 = 95/5

流   速:1.0 mL/min

溫   度:30°C / 40°C

檢   測:UV 203 nm

濃   度:樣品按藥典方法處理

進(jìn)樣量:10 µL

 

在30℃柱溫下,地黃苷D與其前后相鄰雜質(zhì)之間的分離度分別為3.25和1.88,能夠得到良好的分離。在40℃柱溫下,地黃苷D與其前后相鄰雜質(zhì)之間的分離度分別為0.90和1.66,地黃苷D與其前雜質(zhì)未能達到基線(xiàn)分離,升溫不利于分離。

 

 

針對藥典中地黃飲片和熟地黃中地黃苷D的分析,我們總結了以下注意事項:

(1). 由于中藥樣品中成分比較復雜,在不同色譜柱上的分離情況差異比較大,建議客戶(hù)在分析時(shí),可根據具體分離情況,對有機相比例及柱溫進(jìn)行調整,以得到良好的分離。

(2). 地黃飲片及熟地黃中均含有疏水性較大的物質(zhì),我們進(jìn)行80min的洗脫后,仍可能有疏水性物質(zhì)未得到洗脫,建議客戶(hù)使用高有機相進(jìn)行沖洗。

 
 
  

 

綜上所述,使用CAPCELL PAK C18 MGII色譜柱,按照2020版《中國藥典》熟地黃含量測定項下方法,能夠得到滿(mǎn)足藥典分離度和理論塔板數要求的分析結果。

 

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